采集尿液、膿汁、膽汁、分泌物或血液等，以直接涂片進(jìn)行初步檢查。直接涂片染色、鏡檢可見(jiàn)呈短鏈排列，卵圓形革蘭陽(yáng)性球菌。

分離培養(yǎng)后，挑取可疑菌落，進(jìn)行涂片、染色、鏡檢、觸酶試驗(yàn)、膽汁七葉苷試驗(yàn)和6.5%NaCl耐受試驗(yàn)，可鑒定到屬。接種于含血平板，若含革蘭陰性桿菌可選用選擇鑒別培養(yǎng)基，常用疊氮膽汁七葉苷瓊脂，可抑制革蘭陰性菌生長(zhǎng)，而腸球菌分解七葉苷為黑色菌落；35℃～37℃孵育24h后，形成灰白不透明、表面光滑、直徑0.5～1mm大小的圓形菌落，血平板上為α溶血或不溶血。

要鑒定到種還需要進(jìn)行必要的生化試驗(yàn)。對(duì)具有臨床意義的腸球菌應(yīng)進(jìn)行體外藥敏試驗(yàn)，一般要測(cè)試對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)，尤其是青霉素類(lèi)（如青霉素、氨芐西林）、萬(wàn)古霉素和氨基糖甙類(lèi)（如慶大霉素）的敏感性，耐萬(wàn)古霉素腸球菌國(guó)外檢出率較國(guó)內(nèi)高。根據(jù)對(duì)慶大霉素的敏感性水平，可將慶大霉素耐藥的腸球菌分為慶大霉素高水平耐藥及慶大霉素低水平耐藥。同時(shí)也應(yīng)對(duì)β-內(nèi)酰胺酶進(jìn)行測(cè)試。