常用的血清總蛋白測(cè)定方法有哪些?
常用的血清總蛋白測(cè)定方法有多種,主要包括:
1. 雙縮脲法(Biuret Method):這是最經(jīng)典的蛋白質(zhì)定量方法之一。原理是蛋白質(zhì)分子中的肽鍵在堿性條件下與銅離子作用形成紫色復(fù)合物,顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比。
2. 凱氏定氮法(Kjeldahl Method):通過(guò)測(cè)定樣品中總氮量來(lái)間接計(jì)算蛋白質(zhì)量,但此方法耗時(shí)較長(zhǎng)且操作復(fù)雜,在臨床應(yīng)用上較少使用。
3. 染料結(jié)合法 - 考馬斯亮藍(lán)G-250染色法(Bradford Assay with Coomassie Brilliant Blue G-250):利用蛋白質(zhì)與特定染料的結(jié)合能力,通過(guò)測(cè)量吸收光譜的變化來(lái)測(cè)定蛋白濃度。該方法靈敏度高、特異性好。
4. 紫外分光光度法(UV Spectrophotometry at 280 nm):基于蛋白質(zhì)分子中酪氨酸和色氨酸殘基在紫外區(qū)有吸收峰的特性,直接測(cè)量吸光度來(lái)估算蛋白質(zhì)量。此方法簡(jiǎn)單快捷但受其他物質(zhì)干擾較大。
5. 酚試劑比色法(Lowry Method):結(jié)合了雙縮脲反應(yīng)與銅-鉬藍(lán)復(fù)合物生成過(guò)程,靈敏度較高,但由于存在較多影響因素,在實(shí)際操作中需嚴(yán)格控制條件。
6. 免疫濁度測(cè)定法(Immunoturbidimetric Assay):利用特異性抗體與目標(biāo)蛋白質(zhì)形成免疫復(fù)合物后引起溶液渾濁程度的變化來(lái)進(jìn)行定量分析。適用于特定蛋白的檢測(cè)。
以上就是臨床上常用的幾種血清總蛋白測(cè)定方法,每種方法都有其特點(diǎn)和適用范圍,在實(shí)際工作中可根據(jù)需要選擇最合適的測(cè)定手段。
1. 雙縮脲法(Biuret Method):這是最經(jīng)典的蛋白質(zhì)定量方法之一。原理是蛋白質(zhì)分子中的肽鍵在堿性條件下與銅離子作用形成紫色復(fù)合物,顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比。
2. 凱氏定氮法(Kjeldahl Method):通過(guò)測(cè)定樣品中總氮量來(lái)間接計(jì)算蛋白質(zhì)量,但此方法耗時(shí)較長(zhǎng)且操作復(fù)雜,在臨床應(yīng)用上較少使用。
3. 染料結(jié)合法 - 考馬斯亮藍(lán)G-250染色法(Bradford Assay with Coomassie Brilliant Blue G-250):利用蛋白質(zhì)與特定染料的結(jié)合能力,通過(guò)測(cè)量吸收光譜的變化來(lái)測(cè)定蛋白濃度。該方法靈敏度高、特異性好。
4. 紫外分光光度法(UV Spectrophotometry at 280 nm):基于蛋白質(zhì)分子中酪氨酸和色氨酸殘基在紫外區(qū)有吸收峰的特性,直接測(cè)量吸光度來(lái)估算蛋白質(zhì)量。此方法簡(jiǎn)單快捷但受其他物質(zhì)干擾較大。
5. 酚試劑比色法(Lowry Method):結(jié)合了雙縮脲反應(yīng)與銅-鉬藍(lán)復(fù)合物生成過(guò)程,靈敏度較高,但由于存在較多影響因素,在實(shí)際操作中需嚴(yán)格控制條件。
6. 免疫濁度測(cè)定法(Immunoturbidimetric Assay):利用特異性抗體與目標(biāo)蛋白質(zhì)形成免疫復(fù)合物后引起溶液渾濁程度的變化來(lái)進(jìn)行定量分析。適用于特定蛋白的檢測(cè)。
以上就是臨床上常用的幾種血清總蛋白測(cè)定方法,每種方法都有其特點(diǎn)和適用范圍,在實(shí)際工作中可根據(jù)需要選擇最合適的測(cè)定手段。
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