乳鼠心臟取材方法

　　1、乳鼠心肌細(xì)胞比成年心肌細(xì)胞容易培養(yǎng)，而且對(duì)缺血缺氧的耐受性好

　　2、抓住小鼠后頸肩胛骨處，使胸腔向前

　　3、用無(wú)名指和小指固定小鼠后肢。

　　4、將小鼠放入75%酒精中消毒。下面放一個(gè)紗布，吸取掉落酒精

　　5、從小鼠左肋緣鎖骨中線(xiàn)處入剪刀，剪至鎖骨中線(xiàn)，注意剪刀上翹，如果心臟未暴露，可以自剪線(xiàn)的中點(diǎn)剪向胸骨。

　　6、剪取心尖部心肌，放在DMEM中

　　7、用小鑷子輕輕擠壓心尖部，注意不要用力過(guò)度，避免鑷子碰撞。

　　8、換液，清洗二次

　　9、在培養(yǎng)皿中將組織剪碎。

　　10、將心臟剪成1mm3大小的碎片，再將心臟碎片轉(zhuǎn)移至離心管中，加配好的胰酶和膠原酶，37℃消化5min至8分鐘，自然沉淀，棄上清，再加入胰酶和膠原酶，重復(fù)操作，吸取上清，反復(fù)操作6至8次，二次完成時(shí)加入血清，終止胰酶對(duì)細(xì)胞的損害

　　11、操作完成后用濾器除去其中的纖維和膠原等

　　12、離心換液，除去膠原酶，（膠原酶是外來(lái)物質(zhì)，對(duì)細(xì)胞有損傷）

　　將培養(yǎng)瓶放在37°C孵箱中1～2個(gè)小時(shí)，使成纖維細(xì)胞貼壁，而心肌細(xì)胞貼壁多需要6～8小時(shí)，分離作用

　　13、原理：心肌細(xì)胞本來(lái)就是不容易貼壁的細(xì)胞，在除去心肌細(xì)胞中混雜的成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞就是利用成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞貼壁快而心肌細(xì)胞貼壁慢的原理進(jìn)行換皿法來(lái)純化心肌細(xì)胞的。換皿后最好48小時(shí)內(nèi)對(duì)你所培養(yǎng)的心肌細(xì)胞不進(jìn)行任何處理，包括觀(guān)察，這樣應(yīng)該沒(méi)有問(wèn)題了。如果還是不能夠貼壁的話(huà)，你可以考慮一下用塑料瓶，或者對(duì)培養(yǎng)用的玻璃瓶進(jìn)行如下處理：在培養(yǎng)前進(jìn)行鼠尾膠原包被或者硝酸蝕刻或者纖粘連蛋白包被，在這方面有許多文獻(xiàn)報(bào)道的，你只需要注意看都會(huì)有解決辦法的。

　　14、吸取培養(yǎng)液中的心肌細(xì)胞，將成纖維細(xì)胞保存待用，心肌細(xì)胞中加入5—溴尿嘧啶（終止RNA的合成），終止其中的成纖維細(xì)胞的分裂，并做計(jì)數(shù)。

　　15、將心肌細(xì)胞培養(yǎng)十二小時(shí)，一定不要?jiǎng)�，放在孵箱的最里�?/p>

　　16、將心肌細(xì)胞凍存、傳代