
?。?)視待測菌懸液濃度,加無菌水適量稀釋(斜面一般稀釋到10~2),以每小格的菌數(shù)可數(shù)為度。
?。?)取潔凈的血球計數(shù)板一塊,在計數(shù)區(qū)上蓋上一塊蓋玻片。
?。?)將酵母菌懸液搖勻,用滴管吸取少許,從計數(shù)板中間平臺兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣滴入一小滴(不宜過多),讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計數(shù)區(qū),勿使氣泡產(chǎn)生,并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計數(shù)區(qū)上,注意不要使計數(shù)區(qū)兩邊平臺沾上菌懸液,以免加蓋蓋玻片后,造成計數(shù)區(qū)深度的升高。然后加蓋蓋玻片(勿使產(chǎn)生氣泡)醫(yī)學`教育網(wǎng)搜集整理。
?。?)靜置片刻,將血球計數(shù)板置載物臺上夾穩(wěn),先在低倍鏡下觀察到計數(shù)區(qū)后,再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計數(shù)。由于活細胞的折光率和水的折光率相近,觀察時應適當關小孔徑光闌并減弱光照的強度。
?。?)計數(shù)時若計數(shù)區(qū)是由16個大方格組成,按對角線方位,數(shù)左上、左下、右上、右下的4個大方格(即100小格)的菌數(shù)。如果是25個大方格組成的計數(shù)區(qū)。除數(shù)上述四個大方格外,還需數(shù)中央1個大方格的菌數(shù)(即80個小格)。如菌體位于大方格的雙線上,計數(shù)時則數(shù)上線不數(shù)下線,數(shù)左線不數(shù)右線,以減少誤差。
(6)對于出芽的酵母菌,芽體達到母細胞大小一半時,即可作為兩個菌體計算。每個樣品重復計數(shù)2—3次(每次數(shù)值不應相差過大,否則應重新操作),求出每一個小格中細胞平均數(shù)(N),按公式計算出每mL(g)菌懸液所含酵母菌細胞數(shù)量。
?。?)測數(shù)完畢,取下蓋玻片,用水將血球計數(shù)板沖洗干凈,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風機吹干,放入盒內(nèi)保存。