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探針

探針是一小段單鏈DNA或者RNA片段（大約是20到500bp），用于檢測與其互補的核酸序列。雙鏈DNA加熱變性成為單鏈，隨后用放射性同位素（通常用磷-32）、螢光染料或者酶（如辣根過氧化物酶）標記成為探針。磷-32通常被摻入組成DNA的四種核苷酸之一的磷酸基團中，而熒光染料和酶與核酸序列以共價鍵相連。

當將探針與樣品雜交時，探針和與其互補的核酸（DNA或RNA）序列通過氫鍵緊密相連，隨后，未被雜交的多余探針被洗去。最后，根據探針的種類，可進行放射自顯影、螢光顯微鏡、酶聯放大等方法來判斷樣品中是否，或者何位置含有被測序列（即與探針互補的序列）。

分子雜交技術

分子雜交（molecularhybridization）確定單鏈核酸堿基序列的技術。其基本原理是待測單鏈核酸與已知序列的單鏈核酸（叫做探針）間通過堿基配對形成可檢出的雙螺旋片段。這種技術可在DNA與DNA，RNA與RNA，或DNA與RNA之間進行，形成DNA-DNA，RNA-RNA或RNA-DNA等不同類型的雜交分子。作為探針的已知DNA或RNA片段一般為30——50核苷酸長，可用化學方法合成或者直接利用從特定細胞中提取的mRNA。探針必須預先標記以便檢出雜交分子。標記方法有多種，常用的為同位素標記法和生物素標記法。雜交方法又可分為液相雜交和固相雜交。

使單鏈DNA或 RNA分子與具有互補堿基的另一DNA或RNA 片斷結合成雙鏈的技術。即核酸分子間的雜交。相互雜交的兩種核酸分子間有時并非完全一致，但必有一定的相關性。早在1961年有人創(chuàng)建了DNA與RNA間的分子雜交，但至70年代才發(fā)展成基因分析中一種重要的分析技術，可鑒定基因的特異性。例如可將具有一定已知順序的某基因的 DNA片段，標上放射性核素，構成核酸探針，將它通過分子雜交與缺陷的基因結合，產生雜交信號，從而把缺陷的基因顯示出來，借此可對許多遺傳性疾病進行產前診斷。現又用核酸分子雜交技術診斷乙型肝炎，以及研究其他病毒性疾病和癌瘤的基因結構（癌基因）等。

核酸分子雜交的方法并不復雜。在雜交前先把待分析的DNA加熱或加堿使之變性,分開成單鏈；然后加入放射性核素標記的核酸探針,降溫退火,即獲帶有放射性核素標記的雙鏈雜交分子。1979年又發(fā)展成轉膜雜交，即將電泳分開的核酸片段，經過轉移電泳轉移到硝酸纖維素膜上，進行固相雜交反應，用放射自顯影檢出之。此即著名的薩瑟恩氏印跡法。

無庸置疑，分子雜交的基礎是兩個核酸分子間的完全一致，或有一定的相似性或相關性。若所用的核酸探針的片段較長(幾百個核苷酸以上)，可以得到很準確的鑒定結果。但若人工合成的寡核苷酸探針片段較短（如20——30個核苷酸），則難免會出現準確性差的假陽性現象?，F又有非放射性核素標記核酸探針，如以堿性磷酸酶標記的酶標核酸探針，以及以生物素標記的核酸探針等，這必將有助于推動分子雜交在臨床醫(yī)學中的廣泛應用。

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