方法名稱：

注射用鹽酸去甲萬古霉素—鹽酸去甲萬古霉素的測(cè)定—高效液相色譜法

應(yīng)用范圍：

本方法采用高效液相色譜法測(cè)定注射用鹽酸去甲萬古霉素中鹽酸去甲萬古霉素（C65H73Cl2N9O24 ·HCl）的含量。

本方法適用于注射用鹽酸去甲萬古霉素。

方法原理：

供試品加水溶解并定量稀釋，進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)280nm處檢測(cè)鹽酸去甲萬古霉素吸收值，計(jì)算出其含量。

試劑：

1. 三乙胺緩沖液

2. 乙腈

3. 四氫呋喃

儀器設(shè)備：

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按去甲萬古霉素峰計(jì)算不低于1500。

1.3 紫外吸收檢測(cè)器

2. 色譜條件

2.1 流動(dòng)相：梯度洗脫，見下表：

流動(dòng)相A：三乙胺緩沖液 乙腈 四氫呋喃=96 3 1

流動(dòng)相B：三乙胺緩沖液 乙腈 四氫呋喃=70 29 1

時(shí)間（分鐘）

流動(dòng)相A（%）

流動(dòng)相B（%）

0

100

0

23

100

0

38

0

100

40

0

100

41

100

0

50

100

0

2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm

2.3 柱溫：室溫

試樣制備：

1. 三乙胺緩沖液

取三乙胺6mL，加水2000mL，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.2

2. 稱取供試品

取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，精密稱取適量。

3. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取適量，加水溶解并制成每1mL含1.0mg的溶液，搖勻，即得。

4. 供試品溶液的制備

將供試品加水使溶解后，并制成每1mL含1.0mg的溶液，搖勻，即得。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

操作步驟：

分別精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μL 注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)280nm處測(cè)定去甲萬古霉素的吸收值，計(jì)算出其含量。每1mg的C65H73Cl2N9O24相當(dāng)于1000去甲萬古霉素單位。