方法名稱： 卡巴膽堿注射液—卡巴膽堿的測(cè)定—分光光度法

應(yīng)用范圍： 本方法采用分光光度法測(cè)定卡巴膽堿注射液中卡巴膽堿的含量。

本方法適用于卡巴膽堿注射液。

方法原理： 供試品置碘瓶中，依次加鹽酸溶液、次氯酸鈉試液、苯酚溶液、碘化鉀溶液及淀粉指示液，用水稀釋至刻度，置紫外可見分光光度計(jì)，于590nm波長處測(cè)定吸收度，計(jì)算出其含量。

試劑： 1. 鹽酸溶液（0.1mol/L）

2.次氯酸鈉試液

3. 0.5%苯酚溶液

4. 3.5mol/L鹽酸溶液

5.氫氧化鈉滴定液（1mol/L）

6. 0.3%碘化鉀溶液

7. 淀粉指示液

8. 0.3%碘化鉀溶液

儀器設(shè)備： 紫外可見分光光度計(jì)

試樣制備： 1. 鹽酸溶液（0.1mol/L）

取鹽酸9mL，加水適量使成1000mL，搖勻。

2. 次氯酸鈉試液

取1體積次氯酸鈉溶液，用水稀釋至15體積，放置30分鐘，與等體積的1mol/L氫氧化鈉溶液混合，即得，臨用前配制。

3. 3.5mol/L鹽酸溶液

取鹽酸315mL，加水適量使成1000mL，搖勻。

4.氫氧化鈉滴定液（1mol/L）

配制：取氫氧化鈉適量，加水振搖使溶解成飽和溶液，冷卻后，置聚乙烯塑料瓶中，靜置數(shù)日，澄清后備用。取澄清的氫氧化鈉飽和溶液56mL，加新沸過的冷水使成1000mL，搖勻。

5. 0.3%碘化鉀溶液

6. 淀粉指示液

取可溶性淀粉0.5g，加水5mL攪勻后，緩緩傾入100mL沸水中，隨加隨攪拌，繼續(xù)煮沸2分鐘，放7.對(duì)照品溶液的制備

精密稱取卡巴膽堿對(duì)照品適量，加水溶解并定量稀釋制成每1mL中含0.1mg的溶液，即得對(duì)照品溶液。

8. 供試品溶液的制備

取供試品作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

操作步驟： 精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各2mL，分別置50mL碘瓶中，加0.1mol/L鹽酸溶液1.0mL，混勻，加次氯酸鈉試液4.0mL ，用少量水沖洗瓶壁，混勻，放置15分鐘（準(zhǔn)確計(jì)時(shí)），加0.5%苯酚溶液2.0mL，用少量水沖洗瓶壁，使溶液成明顯酸性，混勻，加0.3%碘化鉀溶液1.0mL，混勻，放置5分鐘，加淀粉指示液3.0mL，混勻。將上述溶液移至50mL量瓶中，用少量水沖洗碘瓶，洗液合并到量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，照紫外-可見分光光度法，于波長590nm處測(cè)定吸收度。

注：分光光度法應(yīng)以配制供試品的同批溶劑為對(duì)照，采用1cm的石英吸收池。以吸收度最大的波長作為測(cè)定波長，一般供試品的吸收度讀數(shù)，以在0.3-0.7之間的誤差較小。儀器的狹縫波帶寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度，否則測(cè)得的吸收度偏低。狹縫寬度的選擇，應(yīng)以減少狹縫寬度時(shí)供試品的吸收度不再增加為準(zhǔn)。由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測(cè)定供試品的吸收度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，再計(jì)算含量。

參考文獻(xiàn)： 中華人民共和國藥典，國家藥典委員會(huì)編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，一部，p.104。