熱能分析法

1、氣相色譜--熱能分析法(GC—TEA)

 這種方法能同時(shí)定量檢測煙草特有亞硝胺(TSAN)和揮發(fā)性亞硝胺(VNA)，用于常規(guī)分析煙草及相關(guān)產(chǎn)品和環(huán)境煙氣[3]。通常在燃燒器里點(diǎn)燃10支卷煙并使煙氣通過Φ92mm劍橋?yàn)V片，然后加入二丙基亞硝胺（NDPA）作為內(nèi)標(biāo)，再用CH2Cl2萃取、收集、濃縮，過堿性氧化鋁柱并用MeOH/CH2Cl2溶液(1∶10)洗脫，最后用GC/TEA檢測。

李文壽[4]使用SPB-5大孔毛細(xì)管柱(30m×0.53mm)熱能分析儀，熱分解器的溫度控制在475℃，從煙葉中分離，出二甲基亞硝胺(NDMA)、N—亞硝基吡咯(NPYR)、N-亞硝基降煙堿(NNN)、N—亞硝基新煙草堿：(NAT)、亞硝胺酮(NNK)等13種亞硝胺，用劍橋?yàn)V片收集煙氣后分離出NDMA、NPYR、NNN、NAT、NNK等12種亞硝胺濃度的檢測，評價(jià)了不同煙氣收集方法以及主流和側(cè)流煙氣對于亞硝胺測定的影響(表1和表2)，發(fā)現(xiàn)NDMA和NNN等亞硝胺在緩沖液、劍橋?yàn)V片等回收方法中的回收率接近，但是在主流和側(cè)流煙氣中的含量變化卻很大：揮發(fā)性亞硝胺相差2-80倍，而煙草特有亞硝胺相差2-11倍。在非揮發(fā)性亞硝胺的測定中，高效液相色譜和熱能分析儀連用(HPLC—TEA)測定亞硝胺不僅無需對樣品作衍生化處理，而且選擇性很高，正在逐步取代傳統(tǒng)的紫外檢測器(HPLC—UV)。

分光光度法

2、分光光度(SM)法

以亞硫酰氯或HBr—HOAc等去亞硝基劑打斷亞硝胺的N—NO官能團(tuán)，使之產(chǎn)生NOCl或NOBr被吸收液轉(zhuǎn)化為NO2并顯色，測量吸光度后再換算成亞硝胺的含量。該法檢測靈敏度高，反應(yīng)專性強(qiáng)而且快速簡便，擅長測定卷煙和卷煙煙氣中各種亞硝胺的表觀總量。然而，NOBr在吹出過程中會分解成為NO而導(dǎo)致亞硝胺的表觀總量偏低。鑒于此，沈彬等[5]改進(jìn)了該方法，將分解生成的NO再轉(zhuǎn)化成可被分光光度法測定的化合物，并確定了最佳檢測條件。亞硝胺表觀總量的檢出率可達(dá)90%—100%，加標(biāo)回收率為95%。

該方法所需的儀器裝置并不復(fù)雜：選一支帶支管的磨口試管，配備的磨口塞上具有一根通至管底的導(dǎo)氣管。置樣品溶液于試管中，加入HBr/HOAc溶液，并向反應(yīng)體系中通入N2。亞硝胺斷裂產(chǎn)生的NO被吹離溶液后通過洗氣瓶凈化、再通過三氧化鉻管被氧化成為N02，然后被磺胺—鹽酸萘乙二胺吸收液轉(zhuǎn)化為NO2并顯色，最后于540nm處測量吸光度A。由NaN02濃度-吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線換算成亞硝胺的含量。