傷寒菌苗制造菌種檢定：

定菌種可用pH7.2～7.4的肉湯瓊脂、馬丁瓊脂或其他適宜的培養(yǎng)基。

1.培養(yǎng)特性

制造菌苗的菌株應(yīng)具有典型的形態(tài)、培養(yǎng)和生化特性。

2.血清凝集試驗

用37℃培育18～20小時的培養(yǎng)物以磷酸鹽緩沖生理鹽水稀釋成含菌6億/ml，與傷寒菌診斷血清作定量凝集試驗，充分混合后放37℃過夜，以肉眼見到凝集（+）之血清最高稀釋度為凝集反應(yīng)之效價。凝集價不應(yīng)低于血清原效價之半。并用傷寒Vi及O血清做凝集試驗，應(yīng)與Vi血清有凝集，與O血清不凝集，或僅有較低凝集。

3.毒力試驗

用37℃培育12～16小時的瓊脂培養(yǎng)物以生理鹽水稀釋成6億/ml、3億/ml、1.5億/ml及0.75億/ml等濃度的菌液（根據(jù)菌種毒力情況稀釋度可作更改也可增加稀釋度）。每1稀釋度的菌懸液腹腔注射體重14～16g之小白鼠，最少5只，每只0.5ml，觀察3天。使小白鼠于感染后3天內(nèi)全部死亡的最小劑量為1個致死量（LD），1LD應(yīng)不超過1.5億菌。

4.毒性試驗

用37℃培育18～20小時之瓊脂培養(yǎng)物混懸于磷酸鹽緩沖生理鹽水內(nèi)，56℃加溫1小時（或其他方法殺菌）。不加防腐劑。殺菌試驗合格后稀釋為每ml含菌60、30及15億共3個濃度，每個濃度的菌懸液以0.5ml腹腔注射體重15～18g小白鼠5只，觀察3天，注射7.5億菌之小白鼠應(yīng)全部生存，注射15億菌之5只小白鼠可有3只死亡。

5.免疫力試驗

按《傷寒、副傷寒甲、乙三聯(lián)菌苗制造及檢定規(guī)程》1.2.5項進行。醫(yī)學(xué)|教育|網(wǎng)搜集整理

6.抗原性試驗

選體重2kg左右之健康家兔至少3只，用免疫力試驗所用之菌液靜脈注射3次，每次0.5ml，第1次注射7億菌，第2次14億菌，第3次21億菌，每次間隔7天。末次注射后10～14天采血做定量凝集試驗測定效價，2/3家兔血清之凝集效價不低于1∶12800為合格。