方法名稱： 己烯雌酚注射液－己烯雌酚－高效液相色譜法

應(yīng)用范圍： 本方法采用高效液相色譜法測(cè)定己烯雌酚注射液中己烯雌酚的含量。

本方法適用于己烯雌酚注射液。

方法原理： 供試品經(jīng)乙醚溶解并稀釋，揮散乙醚，用甲醇振搖提取并定量稀釋后進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長254nm處檢測(cè)己烯雌酚的峰面積，計(jì)算出其含量。

試劑：

1. 甲醇

2. 乙醚

儀器設(shè)備：

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按己烯雌酚反式體峰計(jì)算應(yīng)不低于1000。

1.3 紫外吸收檢測(cè)器

2. 色譜條件

2.1 流動(dòng)相：甲醇 水=80 20

2.2 檢測(cè)波長：254nm

2.3 柱溫：室溫

試樣制備：

1. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取己烯雌酚對(duì)照品適量，加甲醇溶解并定量稀釋制成每1mL中約含己烯雌酚40µg的溶液，即為對(duì)照品溶液。

2. 供試品溶液的制備

用內(nèi)容量移液管精密量取供試品適量，置量瓶中，用乙醚分?jǐn)?shù)次洗滌移液管內(nèi)壁，洗液并入量瓶中，加乙醚溶解并稀釋制成每1mL中約含己烯雌酚200µg的溶液，搖勻，精密量取5mL置具塞離心管中，在溫水浴內(nèi)使乙醚揮散，用甲醇振搖提取5次（第1~4次各5mL，第5次3mL），每次振搖10分鐘后離心15分鐘，并用滴管將甲醇液移置25mL量瓶中，合并提取液，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

操作步驟： 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器于波長254nm處測(cè)定，按外標(biāo)法以己烯雌酚順式體峰面積的1.26倍與己烯雌酚反式體峰面積的和計(jì)算出含量。

參考文獻(xiàn)： 中華人民共和國藥典，國家藥典委員會(huì)編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005版，一部，p.33。